建库流程
从RNA样品提取到最终数据获得,样品检测、建库、测序等每一环节都会直接影响数据的数量和质量,从而影响后续数据分析的结果。为从源头保证测序数据准确可靠,在数据的所有生产环节都严格把关,从根源上确保高质量数据的产出。建库测序的流程如下所示:
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Total RNA 样本检测
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RNA 富集
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双链cDNA合成
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末端修复、加A和接头
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片段选择和 PCR 扩增
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文库质检
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Illumina测序
分析流程
RNA-seq的核心是基因表达差异的显著性分析,使用统计学方法,比较两个条件或多个条件下的基因表达差异,从中找出与条件相关的特异性基因,然后进一步分析这些特异性基因的生物学意义,分析过程包括质控、比对、定量、差异显著性分析、功能富集等环节。
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