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2023
08-23

完成四大步骤,迅速搞定circRNA、lncRNA、miRNA等调控性ncRNA研究方案

ircRNA、lncRNAmiRNA调控性ncRNA可通过与proteinRNADNA分子互作,发挥其多样化的调控功能。如何搞定调控性ncRNA研究方案?----四足以。

第一步确定ncRNA研究目标

一般可通过以下三种方法,确定研究目标:(1)通过查阅文献,寻找线索,嫁接研究对象,照猫画虎;(2)通过生物信息学,分析挖掘GEOTCGA等数据库相关数据,发现潜在研究目标;(3)通过RNA测序、基因芯片等高通量筛查,获得大量一手原创数据,从中自由选择研究目标。

第二步快速论证ncRNA调控功能

一般在细胞水平,通过gain/loss of function干预第一步确定的ncRNA,使用Western Blot方法检测所关注生物学过程(如自噬、凋亡、增殖、迁移等)的相关marker,论证ncRNA的调控功能。

第三步揭示ncRNA调控作用的分子机制

首先,确定ncRNA的亚细胞定位。然后,通过targetscancatrapidRNAhybridlncbase等生物信息学分析工具,预测与ncRNA互作的RNAproteinDNA;或者,通过gain/loss of function干预ncRNA,再进行RNA测序、基因芯片或蛋白质质谱,筛查ncRNA调控的靶分子。继而,采用RNA pull downRIPChIPChIRPEMSAReporter gene assay等技术,论证ncRNA-proteinncRNA-RNAncRNA-DNA互作关系。

动物水平或临床水平验证


示例图 高通量数据处理与VENN分析图

示例图 ceRNA网络图

示例图 非编码RNA调控网络及功能富集分析(pathway)

示例图 共表达分析散点图



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作者:萌小白
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