ircRNA、lncRNA、miRNA等调控性ncRNA可通过与protein、RNA或DNA分子互作,发挥其多样化的调控功能。如何搞定调控性ncRNA研究方案?----四步足以。
第一步确定ncRNA研究目标
一般可通过以下三种方法,确定研究目标:(1)通过查阅文献,寻找线索,嫁接研究对象,照猫画虎;(2)通过生物信息学,分析挖掘GEO、TCGA等数据库相关数据,发现潜在研究目标;(3)通过RNA测序、基因芯片等高通量筛查,获得大量一手原创数据,从中自由选择研究目标。
第二步快速论证ncRNA调控功能
一般在细胞水平,通过gain/loss of function干预第一步确定的ncRNA,使用Western Blot等方法检测所关注生物学过程(如自噬、凋亡、增殖、迁移等)的相关marker,论证ncRNA的调控功能。
第三步揭示ncRNA调控作用的分子机制
首先,确定ncRNA的亚细胞定位。然后,通过targetscan、catrapid、RNAhybrid、lncbase等生物信息学分析工具,预测与ncRNA互作的RNA、protein或DNA;或者,通过gain/loss of function干预ncRNA,再进行RNA测序、基因芯片或蛋白质质谱,筛查ncRNA调控的靶分子。继而,采用RNA pull down、RIP、ChIP、ChIRP、EMSA、Reporter gene assay等技术,论证ncRNA-protein、ncRNA-RNA或ncRNA-DNA互作关系。
第四步动物水平或临床水平验证
示例图 高通量数据处理与VENN分析图
示例图 ceRNA网络图
示例图 非编码RNA调控网络及功能富集分析(pathway)
示例图 共表达分析散点图
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