多种荧光蛋白GFP、RFP的研究及应用

荧光蛋白（fluorescent protein）属于一种可视化的报告基因编码蛋白，在一定的波长下可发出明亮荧光，它的特点有荧光稳定、容易检测、对细胞无毒害、无需底物和无物种特异性等。常见的有绿色荧光蛋白、红色荧光蛋白等。

绿色荧光蛋白（GFP）简述及应用：
绿色荧光蛋白（GFP）是一个由约238个氨基酸组成的具有潜力的标记物，分子量约27kDa。荧光基团能够自身催化组成生色团，通过紫外光或蓝光激发时发出可见的绿色荧光，荧光性质稳定、具有无可比拟的优势。
GFP的纯化：
1、用PCR扩增出绿色荧光蛋白(GFP)基因
2、插入到pGEX-KG表达载体中,并将构建出的重组质粒命名为pKG- GFP
3、将重组载体导入大肠杆菌DH10β中,经IPTG诱导产生GST-GFP融合蛋白

红色荧光蛋白（RFP）简述及应用
红色荧光蛋白（RFP）是一种会发光的蛋白质，通过它可以看到细胞的活动，进行更深入的研究。RFP异源二聚体是由ddRFPA1蛋白和ddRFPB1蛋白聚合而成。
RFP荧光对PNGase酶活性检测：
1、利用定点突变将N-糖基化位点引入ddRFP
2、突变体在大肠杆菌里(无糖基化系统)表达后获得红色荧光二聚体
3、建立酵母表达系统(有糖基化系统)对蛋白进行表达,获得糖基化蛋白产物
4、将蛋白做体外混合实验,通过测定混合物去糖基化后的荧光强度变化检测PNGase的活性

【荧光标记的组蛋白】：
FITC-Histone
CY3-Histone
CY5-Histone
CY5.5-Histone
CY7-Histone
CY7.5-Histone
ICG-Histone

【荧光标记血红蛋白】：
Hemoglobin-CY5
Hemoglobin-CY3
Hemoglobin-CY5.5
Hemoglobin-CY7.5
Hemoglobin-CY7
Hemoglobin-FITC

【荧光标记核仁蛋白】：
Nucleohistone-CY5
Nucleohistone-CY3
Nucleohistone-CY5.5
Nucleohistone-CY7.5
Nucleohistone-CY7
Nucleohistone-ICG
Nucleohistone-FITC