(一)操作规程
1.制胶
(1)根据所需浓度称取一定量的琼脂糖加入干净的三角瓶中,加入100mL 0.5×TBE电泳缓冲液,放入微波炉中溶解。注意不要沸腾。
(2)将制胶模板两端用胶带封好,调节水平,插入梳子。待凝胶在室温冷却到60℃左右加入EB(终浓度0.5µg/mL)混匀,倒入模板中。注意倒胶要连续,千万不能有气泡。
(3)凝胶自然冷却后,取出梳子,去掉胶带,放入已加0.5×TBE的电泳槽中。电泳槽中液面高于胶面1mm,梳子距槽底约1mm(图2-11)。
图2-11 电泳槽中凝胶、梳子、电泳缓冲液的位置关系
2.加样 将DNA样品和1/6体积的上样缓冲液混合好加入点样孔中。注意不要碰坏点样孔。
3.电泳 接通电源,按5V/cm进行稳压电泳,待指示剂泳动至适当位置时停止电泳。
4.分析 在凝胶分析仪上观察拍照并进行分析。
(二)注意事项
1.电泳前 ①EB是强诱变剂,操作时千万小心。②注意检查电泳的方向(由负极到正极)与电极的方向是否正确。
2.电泳时 观察指示剂溴酚蓝泳动出点样孔后再离开。
3.电泳后 要用胶铲小心取出凝胶,全程都要戴手套操作。
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