小鼠细胞鉴定(Mouse Cell Line Authentication) FAQs

原创作者：Xiankun Zhao

1.小鼠细胞也需要进行细胞鉴定吗？

答：作为基础研究中的第二大常用细胞株模型，小鼠细胞目前也面临着错误识别、交叉污染的问题。因此，与人源细胞株一样，越来越多的SIC期刊以及资金机构都要求提供小鼠细胞鉴定报告。

2.通过什么方法可以对小鼠细胞进行身份鉴定？

答：与人源细胞株一样，STR分型是小鼠细胞鉴定的标准方法。小鼠特异性的STR位点集合，能够解决由于小鼠品系多为近交而导致的细胞很难区分的问题。小鼠细胞STR分型通过了美国国家标准与技术研究院(National Institute of Standards and Technology，NIST)对其进行的方法验证（对50株常用小鼠细胞进行测试）。

3.小鼠STR分型的位点都有哪些？

答：根据NIST 公布的信息，小鼠STR分型位点有1-1, 1-2, 2-1, 3-2, 4-2, 5-5, 6-4, 6-7, 7-1, 8-1, 11-2, 12-1, 13-1, 15-3, 17-2, 18-3, 19-2,和 X-1。而像苏州鉴达 (Genetic Testing Biotechnology, GTB)的小鼠试剂盒，除了以上这18个基因座，还增加了一个人源基因座TH01，以检测是否存在人源细胞污染。

4.小鼠细胞相关的数据库有哪些？

答：相关的数据库有ATCC、DSMZ、Cellosaurus、JCRB等，这些数据库都可以对小鼠细胞株进行信息检索。不过，能够进行数据比对的数据库，目前只有Cellosaurus（CLASTR工具）一家，像ATCC与DSMZ只能比对人源细胞STR数据。根据2023年3月的最新更新，Cellosaurus已经收录26311株小鼠细胞信息，其中92株小鼠细胞有STR标准数据。

5.何时对小鼠细胞进行细胞鉴定为宜？

答：（1）需要发表相关文章或申请课题经费时；（2）应用细胞株进行实验研究时；（3）准备冻存保种、新建细胞库时；（4）当实验室获得新细胞或细胞传代10代以上时；（5）细胞表现不稳定或结果与预期差别较大时。

6.采用STR分型技术鉴定小鼠细胞时，如何判定细胞株存在交叉污染？

答：小鼠为二倍体，因此正常小鼠细胞的STR位点峰图，或为单峰（纯合子）或双峰（杂合子）。如果分型图谱中，多个位点同时出现多等位基因（一般为3峰或4峰）时，则考虑细胞株存在交叉污染。

7. 准备小鼠细胞的样本时，有哪些要求？

答：培养中的细胞或者冻存细胞都可以直接用于STR鉴定；不管何种状态的细胞，一定要保证细胞数量至少为1x10的五次方。另外，其他样本类型（如组织、DNA）也可以进行STR鉴定，提供DNA时应标注好其浓度。

8.小鼠细胞STR鉴定的判定标准是什么？

答：当小鼠细胞的实验数据与数据库中某一细胞的数据匹配度≥80%，即可认为同源。

9.目前，国内小鼠细胞STR鉴定的权威机构有哪些？

答：苏州鉴达 (Genetic Testing Biotechnology, GTB)是国内最早开展细胞鉴定业务的第三方机构，是IJC（The International Journal of Cancer）期刊力推的国内细胞株鉴定权威单位。他们的鉴定周期短，1-2个工作日即可出具报告；可以提供中英文报告。

10.可以对原代的小鼠细胞进行细胞鉴定嘛？

答：如果实验中有用到原代的小鼠细胞，建议也做下STR鉴定。第一，文章投稿时，有些期刊的要求相对严格，不管原代细胞还是永生化的细胞株都会被要求提供细胞STR鉴定报告。第二，对原代细胞进行身份鉴定，虽不能直接确定细胞身份（数据库中未收录原代细胞数据），但可以排除是否存在污染、排除是否为数据库中其他已知细胞。

参考文献：

1. www.jsdna.org/cell

2. http://www.jsdna.org/mobile/information/xuz

3. Jamie L. Almeida al., Interlaboratory study to validate a STR profiling method for intraspecies identification of mouse cell lines. PLoS One . 2019 Jun 20;14(6):e0218412.

4. Jamie L. Almeida al., Authentication of Human and Mouse Cell Lines by Short Tandem Repeat (STR) DNA Genotype Analysis. In: Assay Guidance Manual [Internet]. Bethesda (MD): Eli Lilly & Company and the National Center for Advancing Translational Sciences; 2004.2023 Jan 17.

苏州鉴达(Genetic Testing Biotechnology, GTB)采用STR分型技术，针对人源细胞23个基因座、小鼠源细胞19个基因座（18个小鼠源基因座+1个人源基因座TH01）进行检测，3130XL型遗传分析仪进行毛细管电泳，与DSMZ、Cellosaurus、ATCC等数据库进行比对，出具权威英文报告，为全国近400家科研机构（高校、研究所、医院、公司）提供高质量服务，多家单位已利用鉴达细胞株鉴定服务在高水平期刊（如Clinical Cancer Research、Nature Commnications、Int J Cancer等）发表论文。

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