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2019
02-09

脱纤维血的制备方法

先准备一个采血瓶里面放入少量玻璃珠,连接好采血的管道和针头,用牛皮纸包好进行灭菌。然后无菌采血马上封住瓶口快速而柔和地摇晃直到看见上层出现白色的纤维蛋白,这样除掉纤维就是脱纤血了。
 
用力太大摇晃会导致红细胞溶血。
 
最简单的制备方法就是将羊血抽到事先放好玻璃珠的无菌烧瓶中,然后不断摇动烧瓶,纤维蛋白就会裹到玻璃珠子上。一般4度可保存两个星期。时间再长了就不太好了。最大的区别当然就是脱纤维羊血不含又纤维蛋白了。做含有羊血的培养基时加的就是脱纤维羊血。
 
我来谈谈制备脱纤维羊血的简单方法:采羊血前首先准备好带塞的事先放好玻璃珠的无菌三角烧瓶,用注射器采好羊血注入到烧瓶内,然后,不断地摇动烧瓶,大约10-20分钟直到看见玻璃珠上裹到许多纤维蛋白,方可停止,然后,在超净工作台内分装,在2-8度的冰箱中保存,一般可以保存一个月,最长可以保存个月以上。如果发现溶血了,表示不可以使用了。最大的区别是脱纤维羊血不含纤维蛋白原了,不会凝集。做血平板和巧克力平板就用脱纤维羊血。
如果你的试验要求用脱纤维的羊血,那么就只能用这种,而不可以用普通羊血代替。可以买羊血自己进行脱纤维化,我们的做法是联系好送羊的人,在要进行试验的当天让他送羊来,然后抽血,尽量做到无菌抽取,抽好的血放到盛有玻璃珠的玻璃瓶中,注意玻璃珠实现放进玻璃瓶中并且高压灭菌并且烘干,然后反复震摇,具体时间我也记不清楚了,如果你需要的话就回帖,我再给你咨询一下我们的老师,我们有几个老师经常做这个实验的,主要是现在放假了,那几个老师都不过来上班了。

 

你可以以blood agar base,columbia agar base或TSA作为基础成分,
灭菌后等冷到45度加入无菌的脱纤维绵羊血(1000毫升基础培养基中加100毫升)!
保证好用!

兔血要心脏采血,而羊血要静脉,且容器要烘干
要提醒一点,血一般保存在4度,使用时应一定要先拿出来在室温下平衡一段时间再加入到融化的琼脂中,否则极易局部琼脂迅速降温凝固,形成大的凝块。如果要观察溶血现象,最好使用Columbia Blood agar base,因为该培养基经过优化,用于观察溶血现象较好。没有国产的Columbia Blood agar base,最好用进口的。各位战友对用那种血有不同的观点,但如果要观察溶血,脱纤维绵羊血是最好的!

根据通用的说法,血琼脂培养基有两种配方。
第1种,用于药品卫生检验用血琼脂培养基。它是在普通琼脂培养基的基础上加5%到10%脱纤维血。注意:这里使用的是普通琼脂培养基,而不是单一的琼脂。
国外商用培养基的配方如下:
成分           含量( g/litre )
普通琼脂培养基           10.0
蛋白胨               10.0
氯化钠               5.0
琼脂                15.0
pH 7.3 ± 0.2
将上述基础培养基煮沸后,在121℃下灭菌15分钟。再将其冷却至45-50℃,加入7%的脱纤维无菌血。轻轻振摇并混匀,然后就可倾倒平板了。

第2种,用于菌种保存的煮沸血液琼脂培养基。它的配方为:
牛肉消化液  300ml , 脱纤维羊血  40ml  ,
营养琼脂培养基  250ml ,  pH 7.4 - 7.6

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作者:萌小白
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