什么是siRNA转染？siRNA转染技术原理

RNA 代表核糖核酸和 siRNA——小干扰 RNA（也称为沉默 RNA）。siRNA 是分子中的一种短 (21-23 bp) 双链 RNA 核苷酸，在细胞中发挥各种生物系统的功能。siRNA转染是“转移”，将siRNA细胞内转移到细胞中，这是一个涉及基因沉默的过程。为了成功优化 siRNA 转染，需要合适的转染试剂和转染方法来进行体外和体内RNAi 实验。这些过程因细胞类型和转染方法而异。对于siRNA转染有许多针对特定细胞类型优化的体外siRNA 转染试剂。

siRNA转染技术

体内siRNA于siRNA转染技术应用是基于纳米颗粒、聚合物或脂质体的一种技术。

科学家们发现 siRNA 在大规模沉默基因表达和研究基因功能方面比较有价值。此类实验的成功通常取决于 siRNA的转染方法。可以使用优化的转染试剂和试剂盒在体外和体内转染 siRNA。

影响siRNA 转染效率的因素主要包括培养细胞的生长状况、转染发生的条件、引入的转染方法、以及实验中使用的 siRNA 的质量和数量。

同时，细胞密度、体积、暴露时间和 siRNA 细胞的数量对 siRNA 转染的成功率以及在稳定转染实验中建立稳定的 RNAi 敲低细胞系也起着重要作用。

RNAi 诱导的基因沉默通常用于研究培养细胞中的基因功能。大多数情况下，这些基因功能是由引入小干扰 RNA (siRNA) 或 microRNA (miRNA) 的介入所引起的。siRNA 分子属于双链，长度为 20-24 个碱基对，终止于具有磷酸化 5' 和羟基化 3' 末端的两个突出核苷酸。一个 miRNA 分子是单链的，有 22 个核苷酸长；它与 RNA 的互补片段结合形成双链分子。这两种分子都可能在细胞中自然产生，也可能是人工引入的，它们的作用可能会持续三到七天。

siRNA转染

siRNA体内转染现状

由于 siRNA 具有稳定性差、递送效率低、生物分布不正确以及靶向特定组织等缺点，因此体内 RNAi 研究面临了许多技术挑战。这些技术挑战意味着不适宜在动物身上进行大量的RNAi 实验。

siRNA体内转染主要方法：是通过 RNAi技术：即：使用 siRNA 或 miRNA 、质粒 DNA 、病毒载体等，在体内表达生成短链 RNA (shRNA)，随后加工成活性 siRNA。一般来说，基于病毒的 shRNA 载体在体内提供较高的递送效率，但构建起来比较耗费时间，并且存在免疫原性等问题。

使用 RNAi 技术面临的主要挑战之一是成功地将稳定的功能性 siRNA 或 microRNA 分子传递到目标组织。siRNA 或 miRNA 必须克服核酸酶的降解，逃避先天免疫系统的检测，从而减少脱靶效应并被靶组织所吸收。近来研究发现对 siRNA 或 miRNA 进行化学修饰可以增加它们在体内的稳定性。这些化学修饰维持了 siRNA 分子的效力、功效和特异性，并增加了它们在生物体动态环境中的整体稳定性。

目前市场上常用的siRNA转染试剂主要有RFect 系列转染试剂盒、Lipo2000、Lipo3000，RNAiMAX等都可以用于siRNA的体外化学转染法。

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来源：苏州阿尔法生物