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绿色荧光蛋白(GFP)简述及应用:
绿色荧光蛋白(GFP)是一个由约238个氨基酸组成的具有潜力的标记物,分子量约27kDa。荧光基团能够自身催化组成生色团,通过紫外光或蓝光激发时发出可见的绿色荧光,荧光性质稳定、具有无可比拟的优势。
GFP的纯化:
1、用PCR扩增出绿色荧光蛋白(GFP)基因
2、插入到pGEX-KG表达载体中,并将构建出的重组质粒命名为pKG- GFP
3、将重组载体导入大肠杆菌DH10β中,经IPTG诱导产生GST-GFP融合蛋白
红色荧光蛋白(RFP)简述及应用
红色荧光蛋白(RFP)是一种会发光的蛋白质,通过它可以看到细胞的活动,进行更深入的研究。RFP异源二聚体是由ddRFPA1蛋白和ddRFPB1蛋白聚合而成。
RFP荧光对PNGase酶活性检测:
1、利用定点突变将N-糖基化位点引入ddRFP
2、突变体在大肠杆菌里(无糖基化系统)表达后获得红色荧光二聚体
3、建立酵母表达系统(有糖基化系统)对蛋白进行表达,获得糖基化蛋白产物
4、将蛋白做体外混合实验,通过测定混合物去糖基化后的荧光强度变化检测PNGase的活性
【荧光标记的组蛋白】:
FITC-Histone
CY3-Histone
CY5-Histone
CY5.5-Histone
CY7-Histone
CY7.5-Histone
ICG-Histone
【荧光标记血红蛋白】:
Hemoglobin-CY5
Hemoglobin-CY3
Hemoglobin-CY5.5
Hemoglobin-CY7.5
Hemoglobin-CY7
Hemoglobin-FITC
Nucleohistone-CY5
Nucleohistone-CY3
Nucleohistone-CY5.5
Nucleohistone-CY7.5
Nucleohistone-CY7
Nucleohistone-ICG
Nucleohistone-FITC
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