今天我们要讲的主题是RNA的甲基化修饰。是的，不是DNA不是蛋白，也不是前面我们介绍过的microRNA、lncRNA与甲基化（（策略篇）甲基化：一个与lncRNA剪不断理还乱的主题，（文章篇）S3E15: 组蛋白甲基化修饰在lncRNA水平调控中的作用），就是RNA水平的甲基化修饰。
1. 什么是RNA甲基化修饰？
我们知道DNA的甲基化修饰是发生在胞嘧啶（C）上的，而最常见的RNA的甲基化修饰是m6A（N6-methyladenosine，6-甲基腺嘌呤）和尿苷化修饰（uridylation，U-tail）。
m6A修饰在70年代就发现了，是可以发生在mRNA、lncRNA等RNA的腺嘌呤（A）上的甲基化修饰，在哺乳动物中，发生 m6A修饰的腺嘌呤A比例为0.1–0.4%，算起来每条mRNA只有3-5个m6A甲基化位点。而U-tail是发生在
RNA的尿嘧啶修饰，通常与RNA的降解过程有关。
哺乳动物和酵母中的m6A位于mRNA终止密码子附近和3’非翻译区。RNA修饰能够在转录后水平上调控RNA的稳定性、定位、运输、剪切和翻译，比如mRNA的翻译和选择性剪接，microRNA的成熟等。
DNA和组蛋白的表观遗传学修饰主要在转录水平上起作用。而可逆的RNA甲基化主要在转录后水平上调控基因表达。
2.RNA甲基化修饰的参与者有哪些？
在RNA甲基化修饰过程中，有三类分子参与其中:Writers, Erasers和Readers：
Writers：将甲基化修饰“写入”RNA，即介导RNA的甲基化修饰过程。最常见的分子是METTL3和METTL14，两者可在体外和体内催化mRNA（和其他细胞核RNA）的m6A甲基化。WTAP是这种甲基转移酶复合体中的另一个关键组分。
Erasers：将RNA甲基化修饰信号“擦除”，即介导RNA的去甲基化修饰过程。FTO和ALKBH5可以去除mRNA（和其他细胞核RNA）上的m6A甲基化。
Readers：“读取”RNA甲基化修饰的信息，并参与下游RNA的翻译、降解等过程。比如具有YTHDF结构域的蛋白能够识别并结合mRNA中的m6A，而这种结合会减少mRNA的半衰期促使其降解。
3. 检测RNA甲基化修饰的实验方法有哪些？
MeRIP–Seq（m6A RNA immunoprecipitation，或m6A-Seq）：首先通过m6A特异性的抗体进行免疫沉淀富集，然后通过高通量测序的方法进行分析，以检测发生m6A修饰的RNA转录本。该方法可将m6A残基定位在100–200 nt的转录本区域中，无法在全转录组水平上鉴定m6A的精确位置。
miCLIP（m6Aindividual-nucleotide-resolution Cross-Linking and ImmunoPrecipitation）：含有m6A的RNA与相应抗体结合以后，通过紫外进行交联，反转录得到的cDNA会出现突变或者截断，这样就可以指示m6A的存在。该方法的分辨率为单核苷酸水平。
SCARLET（Site-specific Cleavage And Radioactive-Labeling followed by
ligation-assisted Extraction and Thin-layer chromatography）
通过结合位点特异性的RNA酶H、放射标记和TLC（薄层层析）的方法，对RNA甲基化修饰进行检测，该方法是从单基因通量下检测RNA的甲基化修饰。
4. 关于RNA甲基化的研究，发表的文章状况是怎样的？
由于RNA甲基化是早发现、刚重视的RNA甲基化修饰，所以相关的研究是非常新的，所以近几年有很多的高分文章：
Comprehensive analysis of mRNA methylation reveals enrichment in 3' UTRs and near stop codons.Cell. 2012 Jun 22;149(7):1635-46.
Topology of the human and mouse m6A RNA methylomes revealed by m6A-seq.Nature. 2012 Apr 29;485(7397):201-6.
N6-methyladenosine marks primary microRNAs for processing.Nature. 2015 Mar 26;519(7544):482-5.
Emerging roles of RNA modification: m(6)A and U-tail.Cell. 2014 Aug 28;158(5):980-7.
Gene expression regulation mediated through reversible m⁶A RNA methylation.Nat Rev Genet. 2014 May;15(5):293-306.
Coordination of m(6)A mRNA Methylation and Gene Tranion by ZFP217 Regulates Pluripotency and Reprogramming.Cell Stem Cell. 2015 Dec 3;17(6):689-704.
m(6)A RNA methylation is regulated by microRNAs and promotes reprogramming to pluripotency.Cell Stem Cell. 2015 Mar 5;16(3):289-301.
Nuclear m(6)A Reader YTHDC1 Regulates mRNA Splicing.Mol Cell. 2016 Feb 18;61(4):507-19.
……
5. 有关RNA甲基化修饰的基金中标情况如何？
关于RNA甲基化修饰的国自然基金，我们一共检索到13项，其中RNA m6A修饰的国自然基金有10项，2015和2016年各5项：
从基金申请的情况来看，涉及的疾病有：肿瘤、抑郁和慢性炎性疼痛，基础方向为主要是（干）细胞的分化和RNA的选择性剪接。
关于RNA U-tail修饰的国自然基金有3项：
关于RNA U-tail修饰的研究以生命科学的研究为主，项目比较少。
6.如果想选RNA甲基化作为方向设计课题，可以从哪些方面着手？
总体来看，以RNA甲基化修饰为主题的基金申请还是一个蓝海，因此如果想选RNA甲基化修饰作为研究方向设计课题，可以从以下四种思路着手：
1. 研究RNA甲基化修饰过程中的参与者（Writer、Eraser和Reader）分子在疾病或者某一生命过程中的功能。比如：Mettl3介导m6A甲基化修饰调控慢性炎性疼痛机制研究。
2. 通过MeRIP–Seq/miCLIP等方法首先揭示疾病或者某一生命过程中RNA甲基化修饰的变化，即揭示疾病特异性m6ARNA甲基化图谱。
3. 揭示疾病或者某一生命过程中某一基因的特定RNA甲基化修饰与疾病的关系。即：RNA甲基化修饰——基因转录后调控（比如选择性剪接或者翻译，再或者microRNA的产生过程）——基因表达异常——疾病或者某一生命过程。
4. 鉴定参与RNA甲基化修饰的新分子，或者建立研究RNA甲基化修饰的新方法。
以上四种思路的研究难度是逐渐增加的，大家如果想选RNA甲基化修饰来作为研究方向，可以考虑逐渐增加难度，其中4建立新方法或者鉴定新分子可以说是科学家的工作了。下次我们选一篇第3种思路的文章进行介绍。
最后进行风险提示：由于RNA甲基化修饰非常新，好的方面是研究少，创新性很好找，坏的方面是方法尚不够成熟，入行需谨慎！